Diseño Del Bioreceptor de un Inmunosensor Piezoeléctrico para la Detección de un Antígeno Nativo de Mycobacterium Tuberculosis
La tuberculosis (TB) es una de las enfermedades infecciosas más importantes en el mundo y el diagnóstico oportuno sigue siendo un desafío para su control. Como métodos convencionales de diagnósticos para la TB, se han usado el examen directo con coloración de esputo y el cultivo para determinar la p...
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| Institution: | Universidad EIA |
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| Main Author: | |
| Format: | Trabajo de grado - Pregrado |
| Language: | Español |
| Published: |
Universidad EIA
2013
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| Online Access: | https://repository.eia.edu.co/handle/11190/6683 |
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Marín Muñoz, Paula Andrea 2024-07-15T19:04:24Z 2024-07-15T19:04:24Z 2013 https://repository.eia.edu.co/handle/11190/6683 129 páginas La tuberculosis (TB) es una de las enfermedades infecciosas más importantes en el mundo y el diagnóstico oportuno sigue siendo un desafío para su control. Como métodos convencionales de diagnósticos para la TB, se han usado el examen directo con coloración de esputo y el cultivo para determinar la presencia de la micobacteria; sin embargo, estos métodos presentan ciertas desventajas que limitan las posibilidades de detección temprana y tratamiento eficaz de la enfermedad. En vista de estas limitaciones, en los últimos años se ha avanzado en el estudio de métodos alternativos de detección basados en inmunoensayos, los cuales faciliten el diagnóstico temprano y favorezcan el tratamiento eficaz de casos activos, disminuyendo las tasas de morbimortalidad asociadas con esta enfermedad. Sin embargo, estos métodos de diagnóstico enfrentan retos importantes en cuanto a sensibilidad y especificidad, haciendo necesario el desarrollo de técnicas para el aislamiento de componentes propios del patógeno, como el antígeno de secreción 38kDa, que posiblemente sean buenos marcadores biológicos para la detección de la tuberculosis. Estos biomarcadores purificados, al ser empleados en las técnicas de detección inmunológicas, bien sea implementados en ensayos tipo ELISA o en inmunosensores, podrían incrementar los niveles de sensibilidad y especificidad del ensayo y además podrían ser utilizados en el monitoreo de la eficacia del tratamiento. En el presente trabajo, se presentan las etapas de diseño de un bioreceptor para la detección del antígeno 38kDa nativo de la cepa autóctona circulante en la región antioqueña de Mycobacterium tuberculosis (Mtb) LAM09 que incluye, la purificación del antígeno de secreción, la biofuncionalización de cristales piezoeléctricos con el antígeno proteico y la caracterización topográfica mediante microscopía de fuerza atómica (AFM) de las superficies biofuncionalizadas. Con la metodología mencionada se obtuvieron cristales piezoeléctricos funcionalizados con antígeno de secreción enriquecido en Ag38kDa nativo purificado de filtrados de cultivo de Mtb LAM09 empleado la técnica de cromatografía de afinidad y con proteínas de secreción filtradas de cultivo CFP. Los cristales fueron biofuncionalizados mediante la técnica de monocapas autoensambladas (SAM) modificada y las superficies inmovilizadas caracterizadas cualitativamente con AFM. Estos cristales inmovilizados podrían ser acoplados a un sistema de caracterización de señales de un sensor piezoeléctrico para la detección del antígeno 38kDa nativo de Mtb autóctona. Tuberculosis (TB) is one of the more important infectious diseases in the world and its early diagnosis is still a challenge for control. Conventional methods of diagnostics of TB have been used to detect the presence of mycobacteria, as sputum smear and the culture; however, these methods have disadvantages that limit the possibilities of early detection and effective treatment disease. Due these limitations, in recent years, progress has been made in the study of alternative detection methods based on immunoassays, which may facilitate the early diagnosis and favor effective treatment of active cases, decreasing morbidity and mortality rates associated with this disease. However, these diagnostic methods face serious challenges in terms of sensitivity and specificity, making the development of techniques for the isolation of components specific to the pathogen such as the 38kDa antigen secretion necessary, which may be good biomarkers for the detection of tuberculosis. If these purified biomarkers are used in immunological detection techniques such as ELISA or immunosensors, the levels of sensitivity and specificity of the test may increase, in addition, these purified biomarkers may be used in monitoring the efficacy of treatment. In this research, the design stages of a bioreceptor for the detection of 38kDa native antigen from Antioquia region circulating Mycobacterium tuberculosis Mtb autochthon strain LAM09 are presented, including the secretion antigen purification, biofunctionalization of piezoelectric crystals with the protein antigen, and atomic force microscopy AFM topographic characterization of the biofunctionalized surfaces. With the mentioned methodology, biofunctionalized piezoelectric crystals with purified 38kDa native antigen from Mtb LAM09 culture filtrate, using affinity chromatography technique and secretory proteins CFP filtered culture were obtained. The crystals were biounctionalized using the modified self-assembled monolayers SAM technique and the immobilized surfaces were qualitatively characterized using AFM. These immobilized crystals could be coupled to a characterization system for a piezoelectric sensor for the detection of 38kDa native antigen from autochthon Mtb. Pregrado Ingeniero Biomédico application/pdf spa Universidad EIA Ingeniería Biomédica Escuela de Ciencias de la Vida Envigado, Antioquia Derechos Reservados - Univesidad EIA - 2013 https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ Atribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional (CC BY-NC-ND 4.0) info:eu-repo/semantics/openAccess http://purl.org/coar/access_right/c_abf2 Diseño Del Bioreceptor de un Inmunosensor Piezoeléctrico para la Detección de un Antígeno Nativo de Mycobacterium Tuberculosis Trabajo de grado - Pregrado http://purl.org/coar/resource_type/c_7a1f info:eu-repo/semantics/bachelorThesis info:eu-repo/semantics/publishedVersion Text http://purl.org/redcol/resource_type/TP http://purl.org/coar/version/c_970fb48d4fbd8a85 antígeno 38kDa purificación inmunosensor piezoeléctrico Bioreceptor Mycobacterium tuberculosis Bioreceptor Mycobacterium tuberculosis piezoelectric immunosensor protein purification 38kDa antigen Publication |
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Tuberculosis (TB) is one of the more important infectious diseases in the world and its early diagnosis is still a challenge for control. Conventional methods of diagnostics of TB have been used to detect the presence of mycobacteria, as sputum smear and the culture; however, these methods have disadvantages that limit the possibilities of early detection and effective treatment disease. Due these limitations, in recent years, progress has been made in the study of alternative detection methods based on immunoassays, which may facilitate the early diagnosis and favor effective treatment of active cases, decreasing morbidity and mortality rates associated with this disease. However, these diagnostic methods face serious challenges in terms of sensitivity and specificity, making the development of techniques for the isolation of components specific to the pathogen such as the 38kDa antigen secretion necessary, which may be good biomarkers for the detection of tuberculosis. If these purified biomarkers are used in immunological detection techniques such as ELISA or immunosensors, the levels of sensitivity and specificity of the test may increase, in addition, these purified biomarkers may be used in monitoring the efficacy of treatment. In this research, the design stages of a bioreceptor for the detection of 38kDa native antigen from Antioquia region circulating Mycobacterium tuberculosis Mtb autochthon strain LAM09 are presented, including the secretion antigen purification, biofunctionalization of piezoelectric crystals with the protein antigen, and atomic force microscopy AFM topographic characterization of the biofunctionalized surfaces. With the mentioned methodology, biofunctionalized piezoelectric crystals with purified 38kDa native antigen from Mtb LAM09 culture filtrate, using affinity chromatography technique and secretory proteins CFP filtered culture were obtained. The crystals were biounctionalized using the modified self-assembled monolayers SAM technique and the immobilized surfaces were qualitatively characterized using AFM. These immobilized crystals could be coupled to a characterization system for a piezoelectric sensor for the detection of 38kDa native antigen from autochthon Mtb.
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